Ирина Мастусова родилась 18 мая 1974 года в городе Харьков, Украина. Во время обучения в средней школе посещала Харьковское музыкальное училище имени Лятошинского. С 1978 по 1982 год училась в Музыкальном колледже Санкт-Петербургской государственной консерватории имени Н.А. Римского-Корсакова. В 1987 году окончила теоретико-композиторский факультет этой консерватории по специальности «музыковед, преподаватель, лектор».
Трудовую деятельность Мастусова начала в Школе Культурной Политики, где проработала с 1989 по 1993 год. Имеет большой опыт организационной и управленческой деятельности, работы с социально-значимыми и некоммерческими проектами, проектами в сфере культуры и искусства. С 2003 года работала в команде крупнейшего российского анимационного проекта «Смешарики».
В 2006 году Ирина Мастусова окончила Московскую высшую школу социальных и экономических наук. Позднее получила дополнительное образование в Школе культурной политики менеджеров культуры при Союзе Кинематографистов Российской Федерации. Также стала магистром искусств в Университете Манчестера в Великобритании. Училась в аспирантуре Института философии Российской Академии наук - сектор философии политики и права.
В 2008 году Ирина Геннадьевна заняла должность генерального директора Фонда «Поддержки инициатив в области семьи и детства «Национальный детских фонд».
В 2012 году Ирина Мастусова назначена исполнительным директором «Ассоциации анимационного кино».
Ирина Геннадьевна Мастусова является членом Экспертных советов и Рабочих групп в законодательных и исполнительных органах власти.