На трон Кастилии, 27 ноября 1504 года взошла Хуана I, когда остальные возможные наследники монаршего рода умерли и она осталась единственной возможной правительницей. Хуана была дочерью католических монархов Фердинанда II Арагонского и Изабеллы Кастильской, чей брак стал началом объединения раздробленной Испании. В девичестве она отличалась замкнутым меланхоличным характером, предпочитала уединение. Замуж ее выдали в 17 лет.

Несмотря на то, что Фердинанд и Изабелла имели 5 выживших детей, ситуация с наследием короны Кастилии и Арагона оставалась критической. Во-первых, мальчиком из них оказался только один - Хуан Астурийский. В число оставшихся 4 инфант входила Хуана и три ее сестры.

Одна из них - Екатерина Арагонская, в политических целях была выдана замуж за Генриха VIII Английского. Две другие стали поочередно первой и второй женами португальского короля Мануэла I. Хуана же в 1496 году была выдана замуж за эрцгерцога Филиппа Австрийского, сына императора Максимилиана.

На следующий год неожиданно скончался ее брат - инфант Хуан Астурийский. Возникла угроза монархической унии Кастилии и Арагона. После этого наследницей была избрана следующая по старшинству принцесса - Изабелла Астурийская. Но в 1498 году она скончалась во время родов. Рожденный ею младенец - Мигел, короткое время был наследником трех корон - отцовской португальской и обеих испанских. Но ребенок умер в 1500 году. Следующей по старшинству оказывалась Хуана.

Так как ее брак начинал приносить плоды, это гарантировало определенную стабильность в наследовании короны. Но когда в 1502 году Хуана с мужем приехала в Испанию из его нидерландских владений, королева Изабелла, ее мать, убедилась, что слухи о нестабильном психическом состоянии дочери оказались правдой.

В 1502 году Изабелла, королева Кастилии, мать Хуаны, составила завещание, согласно которому она назначала дочь своей единственной наследницей в Кастилии. Но особо оговаривала, что государством от имени дочери будет управлять и править ее отец Фердинанд II, в том случае, если та окажется недееспособной. Зять, Филипп Австрийский, в последней воле Изабеллы упомянут не был.

После смерти Изабеллы Кастильской в 1505 году кортесы, согласно вышеописанному документу, признали Хуану королевой Кастилии. Но ее супруг Филипп объявил, что регентом новоиспеченной королевы будет все-таки он, а не ее отец Фердинанд. Таким образом, Филипп стал первым королем Кастилии из династии Габсбургов под именем Филипп I.

Но не прошло и года, как осенью 1506 года Филипп заболел оспой и умер. Перед этим тесть успел обвинить его в том, что он держит Хуану в заключении и правит от ее имени незаконно. Страна стояла на пороге войны. После смерти обожаемого супруга королева впала в невменяемое состояние. Она ездила с его телом по Кастилии, не давала похоронить, и периодически вскрывала гроб, чтобы взглянуть на Филиппа.

В Кастилии воцарилась анархия. Король Фердинанд был спешно призван из Арагона, чтобы взять бразды правления в свои руки. Филиппа похоронили. А Хуану в 1509 году по распоряжению отца отправили в замок Тордесильяс под неусыпный надзор. Она оставалась там до 1555 года, оставшиеся 46 лет своей жизни.